SDS-PAGE凝胶制备试剂盒操作步骤
SDS-PAGE Gel Kit
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
目录号：K0022
组分说明及保存条件
Catalog no. |
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| K0022 | K0022A |
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Size | 40-60块胶 | 200-300块胶 | 保存条件 |
30%Acr-Bis(29:1) | 100 ml | 500 ml | 2-8ºC |
分离胶缓冲液 | 100 ml | 500 ml | 2-8ºC |
浓缩胶缓冲液 | 50 ml | 250 ml | 2-8ºC |
APS（过硫酸铵） | 0.5 g | 2.5 g | 2-8ºC |
TEMED | 1 ml | 5 ml | 2-8ºC，避光 |
本产品所提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制10%APS溶液（0.5 g APS加5ml双蒸水、2.5 g APS加25ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
产品简介
本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量
各种浓度的变性PAGE凝胶，方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中
已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
注意事项
1. 10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每
次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用
-20度保存的10%APS。
2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其它条件不变
的情况下，可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚
合过快不利于操作；附表中的 APS及TEMED量可供参考，应根据实际操作情况做
适当的调整。
3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
5. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
6. 本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表3）
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端
1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，
使凝胶表面保持平整。
5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
II灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表2）
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混
合。
3．加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7．待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8．进行常规电泳操作。
附表
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与建议分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度 | 建议分离范围 |
6%胶 | 50-150 kD |
8%胶 | 30-90 kD |
10%胶 | 20-80 kD |
12%胶 | 12-60 kD |
15%胶 | 10-40 kD |
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附表2.配制5%SDS-PAGE浓缩胶
凝胶体积 |
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| 所需各组分体积（单位：ml） | 10%APS | TEMED |
| 双蒸水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 浓缩胶缓冲液（4×） |
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2 ml | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.002 |
4 ml | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.004 |
6 ml | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.006 |
8 ml | 4.56 | 1.36 | 2.0 | 0.08 | 0.008 |
实验代做服务：
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