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博莱霉素溶液的配制方法来了解下
点击次数:7152 更新时间:2020-05-27
   博莱霉素是分子生物学中常用的真核抗生素,同时又可以用于大肠杆菌筛选。
  在使用带有bleo或Zeocin R筛选标记的载体DNA转染或转化细胞时,向培养基加入Zeocin可以杀死没有被转染的细胞,筛选出阳性转染或转化的细胞。
  博莱霉素应用领域:
  可选择Sh ble基因表达的细胞。与现在使用的其他动物细胞标记物无交叉抗性
  因此这种抗生素可用来分离对其他筛选剂(如:庆大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素,在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli)、真菌(如:酵母菌)、植物细胞、动物细胞。
  博莱霉素溶液的配制方法:
  1. 先将使用到的所有器具高温灭菌,仪器表面、工作台面消毒。
  2. 在分析天平上称取博莱霉素粉末0.500 g,加10 mL无菌水溶液溶解。
  3. 用0.2微米滤膜过滤除菌到无菌容器中,然后分装到 1.5 mL EP管中。
  不建议使用螺旋盖管子,容易污染。-20度保存。
  为避免污染和反复冻融,建议分装成小规格的,如500 uL。
  博莱霉素使用办法:
  1、液体Zeocin可用于细胞培养。
  2、用于筛选转化株的Zeocin浓度根据PH值和盐浓度改变。
  3、PH越高,盐浓度越低Zeocin活性越大。
  4、普通大肠杆菌菌株筛选可在25 ?g/ml zeocin浓度的低盐LB琼脂培养基中进行,PH调至7.5 。
  5、动物细胞筛选:根据不同细胞系从100 到 750 ?g/ml 。
  6、植物细胞筛选:根据不同的细胞种类和培养基从50 到 250 ?g/ml 。
  7、酵母筛选:取决于种属和培养基,S. cerevisiae Sh ble转化株在50 ?g/ml 浓度的YPD培养基中筛选,PH7.0. 304015

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