无血清的培养基的制备
现在应用的无血清培养基种类很多,一些厂家可提供针对特殊类型细胞的无血清培养基.制备无血清培养基的操作方法与制备常规培养基的程序大致相同.配制时要用超纯的试剂和水,小心配制Ca2+,Fe2+或Fe3+的溶液,防止产生沉淀.在碱性pH的条件和有磷酸盐存在的条件下金属盐溶液会产生沉淀,在培养基或盐溶液经过高压灭菌后尤为如此,所以储存液中的阳离子必须保存在低pH条件下,并且要保证无磷酸盐的存在.溶液要经过高压灭菌或过滤消毒.通常推荐的方法是临用培养基之前再加阳离子.或者将各种组分通常要配制成一系列的储存液:1000×的矿物质和维生素,50×的酪氨酸,色氨酸,苯丙氨酸溶解于0.1mol/L HC1中,100×的必需氨基酸溶解于水中,10×的盐溶解于水中,还有其他的特殊辅助因子,脂类等配制成1000×溶液.这些成分要按照正确的比例配制并稀释到终的浓度,然后检测pH和渗透压.
建议在使用培养基之前再分别加生长因子,激素,和细胞黏附因子,并且要调整到适合于特定的实验条件.
