RNA Pulldown、DNA Pull-down

实验意义：

核酸与蛋白质的互作是细胞功能的核心，包括蛋白质合成、mRNA组装等生命活动中重要的代谢过程，研究核酸与蛋白质的互作是研究生命科学的基本工具。

实验原理及步骤

RNA Pull-down:通过体外转录RNA并用生物素进行标记，然后与胞浆蛋白混合物共同孵育形成RNA蛋白质复合物，然后用链霉亲和素标记的磁珠分离纯化该复合物(利用生物素与链霉亲和素的非共价亲和作用)。洗脱后进行检测，如果检测蛋白为已知蛋白可通过WB进行鉴定，如果检测未知蛋白则可以结合质谱进行鉴定。流程为提取细胞胞浆蛋白样品液- -体外转录合成生物素标记RNA-共孵育_ -磁珠纯化- -洗脱得到互作蛋白. -WB或质谱鉴定。

DNA Pull-down:通过合成标记有生物素的DNA片段，与细胞核蛋白混合物共同孵育形成DNA-蛋白质复合物，然后用链霉亲和素磁珠纯化，WB或者质谱进行检测鉴定。流程为提取核蛋白样品液- -合成生物素标记DNA-共孵育- -磁珠纯化- ~洗脱

得到互作蛋白- -WB或质谱鉴定。

结果展示

RNA Pull-down

DNA Pull-down .

实验周期及交付标准

1.实验周期: 1-2个月

2.交付标准:

RNA Pull-down:探针序列、X光片.实验报告(实验步骤、试剂、仪器等)

DNA Pull-down:探针序列、X光片.实验报告(实验步骤.试剂、仪器等)

需确认信息

1.目的基因种属及ID号

2.基因序列信息

3.样本种属及类型

4.样本数量.

5.分析要求

参考文献

[1]Chen R,Liu Y，Zhuang H，et al. Quantitative proteomics reveals that long non-coding RNA MAL AT1 interacts withDBC1 to regulate p53 acetylation[J]. Nucleic Acids Research, 2017, 45(17):9947-9959.

[2]Tran D H , Shishido Y，Chung S P , et al. lnentication of DNA-binding proteins that interact with the 5-f1anking region

of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and

mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 2015, 116:94-100.

部分实验代做服务