免疫组化试剂盒使用说明书
工作原理:
辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB在 H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。
试剂盒内容:
| 名称 | 规格 |
1 | 0.01mol/L pH6.0枸橼酸盐缓冲液 | 1L |
2 | PBS缓冲液 | 2L |
3 | 广谱二抗 | 3mL |
4 | 30%H2O 2 | 10 mL |
5 | DAB显色液I | 0.6mL |
6 | DAB显色液II | 0.6mL |
自备试剂:无水乙醇、苏木素。
操作步骤:
1. 60℃常规脱蜡至水后,将石蜡切片先后浸入二甲本苯Ⅰ,二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐级降浓度酒精入水,每次3-5 min。
① | 无水洒精 | 3-5min |
② | 90% 酒精 | 3-5min |
③ | 85% 酒精 | 3-5min |
④ | 75% 酒精 | 3-5min |
⑤ | PBS洗涤3次 | 每次5 min |
2.热修复抗原: 将切片置于0.01mol/L pH6.0枸橼钠缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 min后,反复1-2 次,置于室温自然冷却。0.01 mol/L pH6.0的PBS洗涤3次,每次5 min
3.消除内源性过氧化物酶:用3% H 2 O 2 室温孵育 5-10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5 min;
4.滴加一抗: 滴加适当稀释的一抗到切片上,37℃孵育1小时左右或者4℃过夜, pH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
5.加入广谱二抗,37℃孵育1小时,取出后PBS洗涤3次,每次5 min。
6.DAB显色: 取DAB显色液I及II各50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室温显色,镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。
7..观察显色后自来水冲,苏木目精复染1-2min,,自来水冲10min,梯度酒精脱水,二甲本苯透明,中性树胶封片,干燥,分析拍照
免疫组化实验代做报价
WB实验代做报价
细胞粘附代做报价