EASYspin 组织/细胞 RNA 快速提取试剂盒
EASYspin RNA Rapid Tissue and cell Kit
保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
产品介绍：
*的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，然后用乙醇调节结合条件后,RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H20 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。
自备试剂：乙醇, β-巯基乙醇注意事项：
1.需要自备一次性注射器，研钵。RA105 EASYspin 组织 细胞RNA快速提取试剂盒
-MBI2.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3.关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法*避免DNA 的微量残留,本公司的EASYspin 系列RNA 提取产品，在大多数 RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留（一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的
mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：
1） 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2） 选择基因组DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
操作步骤：
提示：
ð *次使用前请先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入量无水乙醇!
ð 操作前在裂解液RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1 ml RLT 中加入 10μl β-
巯基乙醇。此裂解液建议现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。
1. 组织培养细胞
a. 收集<107 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接裂解， 细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
b. 2,000rpm 离心 10 sec（或者 300g 离心 5 min），使细胞沉淀下来。*吸弃上清，留下细胞团，注意不*弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。
c. 轻弹管壁将细胞沉淀*松散重悬， 加入 350μl（<5x106 细胞） 或者 600μl
（5x106-1x107 细胞）裂解液RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡 20 sec，充分裂解。
d. 用带钝针头的一次性 1ml(配 0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高产量。
e. 接操作步骤项下 3。
2. 动物组织（例如鼠肝脑）
a. 电动匀浆： 新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块, 加入 350μl(<20mg 组织) 或者
600μl(20-30mg 组织)的裂解液RLT 后电动*匀浆 20-40 sec。
b. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(20mg/30mg)转入 装有 350μl/600μl 组织裂解液 RLT 的 1.5ml 离心管中, 用手剧烈振荡 20 sec，充分裂解。用带钝针头的一次性 1 ml(配 0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 sec),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。
c. 将匀浆后裂解物 12,000rpm 离心 3 min,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物,
将裂解物上清小心转到一个新离心管。
d. 接操作步骤项下 3。
3. 较精确估计裂解物(上清)体积,加入等体积的 70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!）,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
4. 立刻将混合物(每次小于 700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 离心 60 sec，弃掉废液。
5. 加 350μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将吸附柱 RA 放回收集管中。
6. DNaseI 工作液的配制：取 10μl DNaseI 储存液放入新的 RNase-free 离心管中，加入
70μl RDD 溶液，轻柔混匀。
7. 向吸附柱 RA 中央加入 80μl DNaseI 工作液，室温放置 15 min（一般情况下室温放置可得到较好的消化效果，如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min）。
8. 加 350μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12，000rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将吸附柱 RA 放回收集管中。
9. 加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 30 sec，弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW,重复一遍。
10. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11. 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free wate（r 事先在65℃水浴中加热效果更好），室温放置1 min，12,000rpm 离心 1 min。
