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T4 DNA连接酶—BR

英文名： T4 DNA Ligase

别名：

CAS号： 9015-85-4

MDL： MFCD00163508

T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的连接反应，也能催化双链RNA 5´ -磷酸末端和3´ -羟基末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。以上反应均需消耗ATP。 随酶附带10×T4 DNA Ligation Buffer及*配方的2×Quick Ligation Buffer提供给您更多的选择：而使用10×T4 DNA Ligation Buffer，16℃过夜连接可获得最高的连接效率；使用快连Buffer在室 温(25℃)下，仅需5分钟即可完成粘性末端或平滑末端DNA的片段的连接反应。

使用建议：粘末端的连接反应：插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要，此比例在2-6之间为好，低于2:1就会导致较低的连接效率，高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段DNA浓度及分子大小来计算。

平滑末端的连接反应：平滑末端的连接反应与突出末端相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。进行平滑末端的连接反应时，可提高DNA浓度，将使用酶量增加到突出末端量的2～5倍左右。 向粘粒或噬菌体进行连接反应：可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1，同时增大DNA浓度以便取得良好效果。(0.05～0.1μg／μl以上)

反应温度： 该酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此 长时间反应时通常需在16℃下进行。若反应1-2小时左右的话也可在室温下进行反应。

抑制剂：T4 DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍反应。将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的DNA准备作为样品使用 ，先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。

储存条件： -20℃

用途： DNA的片段和载体DNA的连接

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