产品简介：

Trizol(总 RNA 提取试剂)

Trizol 是一种新型的用于细胞或组织的总RNA提取试剂，Trizol采用不

Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其颜色、抽提的方法和步骤不后者*相同。

Trizol 含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持

RNA 的完整性。加入氯防仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总 RNA，中间层用乙醇沉淀回收 DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。

Trizol 适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～

100 mg 组织、5×10 细胞)，也可用于大量样品(>1g 组织/>10细胞)。提取的总RNA质

量高，可用于 North⁶ern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程 1 小时内完成；③

纯度高；④污染少。

产品组成：

Trizol Reagent

100ml 4℃ 避光

自备材料：

1、试剂：无水乙醇、氯防仿、异丙醇、DEPC处理水等。

2、耗材：RNase 广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，RNase 是导致 RNA降解的最主要物质，非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、 实验仪器等应清除 RNase，移液器吸头、EP 管等制品的 RNase free处理尤为重要。

3、仪器：低温高速离心机、低温冰箱。

操作步骤(仅供参考)：

1、样品准备

⑴贴壁细胞：

①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入 Trizol 裂解细胞，每 10cm 面积加 1ml Trizol，用移液器吹打混匀。 ²

②胰蛋白酶消化：用无菌  PBS 洗涤细胞后，加入含有  0.05～0.25%胰蛋白酶的  PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase 的离心管中，5000～6000g 离心 5 min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不*，降低 RNA收获率。

⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接 5000～6000 g 离心 5 min，收集细胞。每 5×10 ～10

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动⑶物组、织植：物取和新酵鲜母动细物胞或或者每植物1组0 织或细者菌-细7胞0℃加冻入存1组m织l ，Tr5i0z～o1l0。0mg 组织在液氮中充分研

磨或者加入  1ml Trizol 研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过  Trizol体积的

10%。研磨要迅速，以 1min为佳。

⑷血液：取 0.5～1 ml 新鲜或冻存的血液，12000g 离心 5 min，去除血浆，加入 1ml Trizol， 充分振荡混匀。

2、核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存 5～10 min 后，充分振荡，反

复 1～3 次)，将裂解样品或匀浆液室温放置 5～10 min，使核蛋白不核酸*分离。

3、样品分层：加入 0.2 ml 氯防仿/1ml Trizol，剧烈振荡 15s，室温放置 2～3 min。置于 4℃离心机，12000 g 离心 10～15 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。

4、沉淀 RNA：吸取上层水相(约  500μl)转移至无 RNase 的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积Trizol与用  RNA沉淀液，超低温冰箱放置 2～3hr,可以大大提高 RNA回收率），室温放置 15～20 min。12000g 4℃离心 10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。

5、洗涤 RNA：加入 1ml DEPC水配制的 75%乙醇/1ml Trizol洗涤沉淀(或者加入1ml

Trizol与用RNA洗涤液，可以大大提高RNA纯度），室温放置5～10min，7500g 4℃离心5 min，弃上清。室温干燥5～10min，不宜过分干燥，否则 RNA难以溶解。

6、溶解 RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品，沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。

分析与定量：

1、测定样品在 260nm 和 280nm的吸收值确定  RNA 的质量。按  1OD=40pg RNA计算

RNA的产率。OD260/280 在  1.8～2.0 视为抽提  RNA 纯度较好。浓度在 4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。

2、进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。

3、核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。

注意事项：

1、样品保存：加入 Trizol 混匀后，样品可在-70℃放置 1～2 月；RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。

2、Trizol是强腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求 医生的帮助。

3、Trizol 可常温运输，建议保存 4℃保存。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12 个月有效。

常见问题分析：

常见问题 可能原因

抽提得到的RNA沉淀未*溶解。

水相中混有有机相，从而存在蛋白质和 DNA污染。

A260/ A280＜1.6 RNA样品用水而不是 TE溶解。低离子浓度和低 pH 条件下，A280值会偏高。样品匀浆时加的  Trizol 试剂太少，RNA 不蛋白质、DNA未能*分离。

匀浆后样品未在室温放置或者放置时间太短，RNA不核蛋白未*解离。

样品中含组织溶剂(如乙醇等)或碱性溶液，致水相减少或 pH升高。

DNA 污染

样品匀浆时加入的试剂体积太少。如果存在 DNA污染，可用 DNA清除剂去除。水相中混有有机相，从而存在蛋白质和 DNA污染。

RNA 产量低

RNA 降解

蛋白和多糖污染

样品裂解或匀浆处理不彻底，RNA没有被*释放出来。得到的 RNA沉淀未*溶解。

抽提的RNA中含有 RNase。

组织或细胞不新鲜，样品没有及时被液氮冻存，导致组织或细胞中的 RNA 降解。溶液或离心管未经 RNase free 处理，RNase 的污染导致RNA被降解。

细胞在胰蛋白酶消化时间过长，导致未加  Trizol 前 RNA已经部分降解。

电泳时使用的甲酰胺 pH小于 3.5，导致 RNA发生酸解。水相中混有有机相，从而带有蛋白质和 DNA。样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大，细胞未裂解*。