琼脂糖凝胶 CL-4B
琼脂糖凝胶 CL-4B 是用 4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒,作为凝胶层析介质使用。
1 理化指标
项 目 | 指 标 |
基质 | 4%琼脂糖凝胶 |
分离范围 | 60000~20×106 |
形状 | 球型 |
粒径 | 45~165 μm |
推荐流速 | 15 cm/h*
|
耐压 | 0.025 MPa |
pH 适用范围 | 3-13(长时间),2-14(短时间) |
化学稳定性 | 可耐 8mol/L 尿素、6mol/L 盐酸胍 |
*检测条件: 层析柱 10mm×300mm *柱床高 5cm,25℃,流动相为 0.1mol/LNaCl。
2 贮存
产品应密封贮存在 4℃~25℃(保存溶液为 20% 乙醇),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在 4℃(20% 乙醇)。保质期:5 年。
3 应用
本产品为传统的琼脂糖介质,非特异性吸附低,回收率高,可多次重复使用等特点,用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。
3.1 装柱
(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。
(2)根据柱子大小取所需量的凝胶,用去离子水清洗掉 20%乙醇,用缓冲液(按凝胶:
缓冲液=3:1 的比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位,务必使底端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。
3.2 平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和 pH 不变。
建议使用离子强度为 0.15 或更大的缓冲液,以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。对于各 Sepharose 凝胶的推荐流速,请参考推荐流速越低,分离度越高。
3.3 上样
(1)样品用平衡液配制,样品一定要离心或过滤后上样。
(2)推荐的样品体积为总床体积的 2-5%。
3.4 洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
3.5 再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
在一些应用中,诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。 这些可以使用下述步骤清除。
出现下面这些情况,是必须需要清洗再生的:
(1)背压增加;
(2)色谱柱顶部的颜色变化;
(3)分辨率降低;
(4)转换接头和凝胶表面之间出现空隙。
如果观察到增加的背压,在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染;
通过用 0.1M NaOH 以推荐线性流速洗涤柱子,除去沉淀的蛋白质,非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。
3.6 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。
注意事项:
1.上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
2.在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于 0.15 摩尔。碱会使流速变慢。
3.不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。