OCT樱花包埋剂（Optimal Cutting Temperature Compound，商品名中含“樱花”源自日本樱花公司，该品牌为冷冻切片包埋剂的品牌之一）是一种水溶性聚乙二醇和聚乙烯醇类混合物，专门用于冰冻切片时对组织样本进行包埋支撑。在病理学、组织化学、免疫组织化学及分子生物学等研究领域，许多实验需要在未经石蜡包埋和脱蜡处理的条件下对新鲜或固定后的组织进行快速切片，以保留抗原活性和酶活性。OCT包埋剂在低温下冷冻凝固后将组织包裹其中，为切片机的刀片提供一个均匀、坚固的支撑介质，使薄切操作能够顺利开展，同时避免组织在切片过程中发生扭曲或破碎。
该包埋剂的主要成分包括聚乙二醇（PEG，形成支撑骨架）、聚乙烯醇（PVA，增加韧性）以及少量防腐剂。其外观为半透明、有一定粘稠度的液体，冷冻后变为不透明的白色固体。与常规的石蜡包埋不同，OCT包埋剂不需要经过脱水、透明和浸蜡等高温处理步骤，组织在包埋过程中基本保持在接近生理状态的水合环境中，因而特别适用于酶组织化学、免疫荧光及原位杂交等对抗原/核酸保存要求较高的实验。使用OCT包埋剂制备的冷冻块在-20℃至-30℃温度下达到合适的切割硬度，切片厚度可达2-10μm，可直接贴附于载玻片上进行后续染色或反应。以下从主要特点、使用方法和注意事项三个方面展开介绍。
一、主要特点
1.快速冷冻特性：OCT包埋剂在-20℃左右的冷冻切片机内迅速凝固，与组织之间形成良好的融合和支撑。冷冻速度较快可减少冰晶对组织细胞形态的损伤。
2.水溶性：包埋块在切片后可用水或缓冲液轻易洗去，不影响后续染色或抗体孵育步骤。这一点与石蜡切片需要用二甲苯脱蜡形成明显对比。
3.适宜的切割硬度：在冷冻切片机的工作温度下（通常-18℃至-30℃），OCT包埋剂具有与组织相近的硬度，不脆不粘，能够切出连续、平整的薄片。
4.折射率匹配：包埋剂凝固后的折光率与组织相近，在切片和观察时界面反光较少，有利于显微镜下的形态观察。
5.多种规格包装：市售OCT包埋剂常见包装规格为118mL、125mL及500mL塑料瓶，配有螺口盖或压嘴头，方便取用。
二、使用方法
1.组织准备：取新鲜组织或经固定后的组织，修整成合适大小（一般面积不超过2cm×2cm，厚度不超过5mm）。组织表面应尽量平整，如有较多液体可用滤纸吸干，避免包埋时形成过多冰晶。对于免疫组化检测，组织需先用4%多聚甲醛或10%福尔马林固定，再转入15%-30%蔗糖溶液中脱水过夜（防止冻融过程形成冰晶）。
2.包埋操作：将冷冻切片机预冷至工作温度（通常-20℃）。将适量OCT包埋剂滴加于冷冻切片机的样品托（chuck）上，形成薄薄一层。用镊子将组织放置于包埋剂上，调整位置使目标切面平行于样品托底面。在组织周围及上方再滴加OCT包埋剂，覆盖组织。将样品托快速置于冷冻切片机冷冻台上加速凝固，或用液氮速冻（较厚组织时，但需注意防止剧烈气溶胶导致组织裂隙）。整个包埋过程宜在5-10分钟内完成，避免长时间暴露导致组织脱水。
3.冷冻块修整：包埋剂凝固后（约5-10分钟），将样品托安装在切片机的夹持器上。用刀片或切片机粗修去除多余包埋剂，修整出一个平整的包埋面，使组织处于适当位置。
4.切片：将刀片温度调节至与包埋块相近（温差不宜过大）。设置所需切片厚度（常规3-10μm），以均匀速度转动切片机摇轮。切出的薄片应完整、无褶皱、无裂纹。用清洁的毛笔或镊子将切片展平，贴附于载玻片上。贴片后可直接进行固定和染色，或短暂存放于-80℃冰箱备用。
5.长期保存：已包埋但未切片的组织块可用铝箔或保鲜膜包裹，置于密封盒中-80℃长期保存（避免水分升华）。已切好但未染色的切片可在-80℃或-20℃短期保存。
三、使用注意事项
1.避免反复冻融：已包埋的组织块尽量避免取出后回温再冷冻，反复冻融会破坏组织形态和抗原性。宜按实验需求提前分割组织，分别包埋保存。
2.防冻伤操作：操作过程中应佩戴防冻手套，避免直接接触已冷冻的样品托和包埋块。液氮速冻应在防护面罩和手套保护下进行。
3.组织方向标记：包埋前应在样品托的对应位置或使用标记笔记录组织切面方向（尤其是对于有极性要求的组织，如神经、肌肉等）。
4.防止气泡产生：包埋剂滴加时应沿样品托边缘缓慢加入，避免混入气泡。气泡在切片时会造成裂孔或刀痕，影响切片连续性。
5.包埋剂与组织的结合：某些含水量极低的组织（如脂肪、骨组织）与OCT包埋剂的结合较差，切片时可能发生分离。可在包埋前对组织表面做适当湿润处理。
6.清洁与维护：包埋剂附着在切片机部件上干结后难以清除。每次使用后应及时用湿布或酒精擦拭样品托座、刀架和载物台，保持设备清洁。
7.安全性说明：部分品牌OCT包埋剂含有极低浓度的防腐剂，对皮肤和粘膜可能有轻微刺激性，建议操作时佩戴手套。虽无急性毒性报告，但仍应避免大量接触或误食。
OCT樱花包埋剂为冰冻切片技术提供了一种便捷、可靠的组织支撑介质，有效解决了新鲜或固定组织因质地柔软而难以直接切片的难题。与石蜡包埋相比，OCT包埋省去了脱水、透明和浸蜡等步骤，缩短了制样周期，同时也保留了组织中的脂溶性物质和抗原活性，使其成为免疫组织化学和酶组织化学实验中较为常用的制样方法。使用者应根据实验目的选择合适的包埋剂——对于常规病理形态观察，OCT包埋剂是方便之选；对于高精度的原位杂交或单分子RNA检测，可能需要专用低荧光背景包埋剂。规范的操作包括：组织充分脱水防冰晶、包埋剂覆盖无气泡、切片温度与组织硬度匹配。实验结束后及时清洁设备，可有效延长切片机的使用寿命。对于不熟悉冷冻切片的操作者，建议先用动物试验组织（如大鼠肝脏）进行预练习，熟练后再处理珍贵的临床或实验样本。
