在细胞培养实验过程中，大家是不是总会好奇别人家的实验总是做的又快又好，而自己做的实验又慢又难得做出自己满意的结果，搞得一天到晚也挺忙的，心想：我也很努力很认真啊，为啥效率总提不起来呢？

　　其实，有时候并不是自己不努力，只是没有找对方法。做实验可不能光是埋头苦干，还要学会运用合适的检测试剂盒，这样就能事半功倍。

　　如果你还在用MTT，那就真的OUT了，MTT花4小时才能得到的结果用CCK-8试剂盒只需1小时，CCK-8试剂盒可用于细胞增殖和毒性分析，同MTT法相比，CCK-8试剂盒即开即用，检测时间大概在1小时左右。

　　不仅如此，CCK-8试剂盒对细胞的毒性极小，*可以测完细胞增殖或药物毒性后再继续用细胞进行下游实验。下面小编就来为大家介绍一下CCK-8试剂盒的具体情况。

　　CCK-8试剂盒基本原理

　　基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazandye）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

　　CCK-8试剂盒产品用途

　　主要用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

　　细胞毒性检测的实验对比

　　CCK-8试剂盒的实验方法与步骤

　　☆实验一：细胞活性检测

　　1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入100μL，使待测细胞调密度至（1,000~10,000）/孔。

　　2.5%CO2，37℃培养细胞24小时（培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异）。

　　3.每孔加入10μLCCK-8试剂盒溶液。如果起始的培养体积为200μL，则需加入20μLCCK-8试剂盒溶液，其它情况以此类推。

　　4.在细胞培养箱内继续孵育0.5~4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定（一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK-8试剂盒反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，CCK-8试剂盒的培养时间一般为1~4小时，注意：CCK-8试剂盒的*反应时间以具体显色的*时间为准）。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

　　5.在450nm测定吸光度。

　　☆实验二：细胞增殖-毒性检测

　　1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入100μL，使待测细胞调密度至（1,000~10,000）/孔。

　　2.5%CO2，37℃培养细胞24小时（培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异）。

　　3.加入10μL不同浓度的待测物质，将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如6、12、24或48小时）。

　　4.每孔加入10μLCCK-8试剂盒溶液。如果起始的培养体积为200μL，则需加入20μLCCK-8试剂盒溶液，其它情况以此类推。

　　5.在细胞培养箱内继续孵育0.5~4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定（一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK-8试剂盒反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，CCK-8试剂盒的培养时间一般为1~4小时，注意：CCK-8试剂盒的*反应时间以具体显色的*时间为准）。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

　　6.在450nm测定吸光度。