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木质素含量检测试剂盒说明书

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详细介绍

木质素含量检测试剂盒说明书

微量法注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格:100T/96S

产品内容:

试剂一:液体 34mL×1 瓶,4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。

试剂二:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。

标准品:粉剂×1支,50mg  木质素,4℃保存。临用前加入 1mL 高氯酸,充分混匀溶解,配成50m




g/mL 的标准液。

产品说明:


木质素是构成植物细胞壁的成分之一,具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中,主要作用




是通过形成交织网来硬化细胞壁,为次生壁主要成分。




木质素中的酚羟基发生乙酰化后在 280nm 处有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低与木质素含关。

试验中所需的仪器和试剂:



紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆




器、EP 管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸馏水。


操作步骤:

一、样品处理:

样品 80℃烘干至恒重,粉碎,过 40   目筛,称取约 3mg 于 1.5mLEP 管中。

二、测定步骤:

1 、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 280nm ,冰乙酸调零。

2 、操作表:在 1.5ml玻璃管中依次加入下列试剂:


测定管

标准管

空白管

样品(mg)

3

-

-

试剂一 (µL)

300

300

300

高氯酸 (µL)

12

-

12

标准液 (µL)

-

12

-

封口膜密封,充分混匀。于 80℃水浴锅水浴 40min ,进行乙酰化。每隔 10min 震荡一次,

然后自然冷却。

试剂二 (µL)

300

300

300

充分混匀后于常温 8000g 离心 10min ,取上清。

上清液 (µL)

12

12

12

 


冰乙酸 (µL)

588

588

588

测定 280nm 下的吸光值 A ,记为 A 测定管、A 空白管、A 标准管,计算△A=A 测定管-A空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、木质素含量计算:

C 标准=C 原液×V 标准÷V 乙酰化×V 上清÷V 检测=0.0196 mg/mL

木质素  = △A÷  (△A 标准÷C 标准)×V 检测÷(W×V 上清÷V 乙酰化)

= 0.5998×△A÷△A 标准÷W




C 标准:标准液在最终检测体系中的浓度,0.0196 mg/mL;C 原液:标准液浓度,50mg/mL;V标准:加入的标准






液的体积,0.012mL;V 乙酰化:乙酰化反应体积,0.612mL;V 上清:上清液体积,0.012mL;V 检测:检





测反



应总体积,0.6mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1 、试剂一有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。

2 、加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。

3 、冰乙酸具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱内操作。


4 、取上清加冰乙酸步骤根据自己样品乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在 0.1-0.8 之间即可,并




在公式中参与计算。

 

 本产品仅供科学研究使用!请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途!

 

 

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