猪乙型脑炎病毒抗体检测试 剂盒说明书

【产品名称】

通用名称：猪乙型脑炎病毒抗体( IgG )诊断试 剂盒（酶联免疫法）

英 文 名 称 ： Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

【规格】

96 T×2

【预期用途】

本试剂盒用于定性测定猪血清中日本乙 型脑炎病毒（又称流行性乙型脑炎）IgG 抗体。 用于评估猪场猪乙型脑炎病毒疫苗免疫状况， 感染猪的血清学诊断以及猪乙型脑炎病毒的 流行病学调查。

【检验原理】

本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验 ( ELISA )原理，由包被有高纯度的猪乙型脑炎 抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗 猪 IgG 及其它试剂配套组成。其反应机理为包 被抗原与样本中的 JEV-IgG 结合，再与酶标 抗猪 IgG 抗体形成“包被抗原+JEV-IgG+酶标 抗猪 IgG 抗体"复合物，加入显色剂，通过酶 催化反应显色。显色深浅与 JEV-IgG 的量成 正比，当显色超过设定的临界值时结果判为阳

性，表明免疫有效或有自然感染。

【主要成份】

1抗原包被板96 T×2

2酶标记物22 ml

3样本稀释液50 ml

4阴性对照血清1.5 ml

5阳性对照血清1.5 ml

6显色剂12 ml×2

7终止液12 ml

810×浓缩洗涤液50 ml

9盖板膜2 张

10说明书1 份

【自备器材】

1 ．酶标仪（双波长 450/630 nm 滤光片）

2 ．微量移液器（单道 10-100 μl 、0.5-10 μl 、多 道 30-300 μl）

3 ．水浴箱或恒温箱

4 ．微量振荡器

5 ．一次性枪头（10 μl ，200 μl）

6 ．去离子水

【样本要求】

1 ．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采 集，2 ℃-8 ℃贮存应不超过一周，长期应在 -20 ℃以下保存。

2 ．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维 蛋白及污染长菌的血清样本。

【实验准备】

1 ．试剂盒组分回温平衡:  试剂盒组分在实验前，

先取出置室温 30 min 。酶标板应在室温中平 衡至潮气干尽后方可拆开。

2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将 样本作 40 倍稀释（例：将 5 μl 样本加至 195 μl 样本稀释液中）。

3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液 直接用去离子水稀释 10 倍（例：将 10 ml 洗涤液加入 90 ml 去离子水中）。若 10 倍浓 缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置 37 ℃ 至溶解后即可。

【操作步骤】

1.  加样：根据样本数量，取所需板条，检测 时，设阴、阳性对照各 2 孔，分别加入不用 稀释的阴、阳性对照血清 100 μl 于相应孔中 （可不设空白对照）。其余为样本孔，每孔加 100 μl 用样本稀释液稀释好的样本。

2.  温育：加样后，盖上盖板膜，置 37 ℃温 育 30 min。

3.  洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应 板孔，静置 10 s ，直接甩出，洗涤 3 次，最 后一次洗涤后吸干板内液体。

4.  加酶：每孔加酶标记物 100 μl。

5.  温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板 膜，置 37 ℃温育 30 min。

6.  洗板：同步骤 3。

7.  显色：每孔加显色剂 100 μl ，振荡混匀， 37 ℃避光反应 10 min。

8.  终止：每孔加终止液 50 μl，振荡 10 s，充 分混匀，终止后即读数。

9.  读数：以 450 nm/ 630 nm 双波长检测，读 取各孔吸光度值（OD 值）。

【结果判定】

在酶标仪上测各孔的OD 值。检测结果有 效的条件是阳性对照孔的平均 OD 值≥0.60， 阴性对照孔的平均 OD 值＜0.40；样品中抗 体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高 低由 S/P 值决定，S/P 值计算时按以下方式处

理:

—                       —

S/P=( 样本 OD450/630 值－NCx )/（PCx -

—                                            —

NC x ) ，其 中 NC x 表示 阴性对 照孔平均

OD450/630 值（若小于 0.05，则按照 0.05 计算），

PC x表示阳性对照孔平均 OD450/630 值；

当样本的 S/P≥0.25 时判为阳性；样品 S/P 值＜0.25 时判为阴性。

【注意事项】

1.  请在使用试剂盒之前，仔细阅读说明书。

2.  请不要使用过期的试剂盒组分，不要将不 同批次的组分混合使用。

3.  本试剂盒应按含有传染性材料对待，试验 废弃物应经 121 ℃高压蒸汽灭菌 30 min ，或 用 5.0 g/L 次氯酸钠等消毒剂处理 30 min 后 废弃。

4.  未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔 袋并密封 2 ℃-8 ℃保存。未用完的液体试剂 应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中 于 2 ℃-8 ℃避光保存。

5.  应用微量移液器加入样本及试剂，并经常 校对其准确性。

6.  加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有 游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

7.  终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应 立即用大量清水冲洗干净。

【储存条件及有效期】

于 2 ℃-8 ℃避光保存，防止冷冻，有 效期 12 个月。

【生产日期及批号】

详见外包装盒

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