细胞分离是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程。细胞纯化更进一步强调从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。

　　分离和纯化细胞的过程不仅仅在原代培养之前进行的，有时分离和纯化细胞的过程还贯穿于原代培养和继代培养的过程中，甚至是主要依赖培养过程实现分离和纯化细胞的目的。

　　细胞分离液是一种经过聚乙烯吡咯烷酮处理过的硅胶颗粒，经过高速离心后可形成连续密度梯度，由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外，分离液不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。

　　细胞分离液的配置与使用

　　1、不同浓度(密度)分离液的制备:先用9份分离液与1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％NaCl或0.15MPBS)稀释到所需浓度。

　　2、不连续密度梯度层的制备:先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层比重相差不大时，可将液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

　　3、装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

　　4、离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

　　5、取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于层中,则需要逐层收集。收获含有液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。