通用型维生素E高效液相色谱法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

GENMED通用型维生素E高效液相色谱法定量检测试剂是一种旨在通过有机溶剂萃取，必要时皂化处理，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下（294nm波长）检测分析，分离出可溶性维生素E波峰，以定量测定样品中α-生育酚的含量的权W而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种油类、植物、蔬菜、食品、血液等样品中维生素E的检测（包括α、β、γ、δ形式）。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

维生素E（vitamin E），又称为生育酚（tocophenol；TCP），是一种由各种甲基化的酚类构成的有机化合物，为脂溶性抗氧化剂。维生素E分成8种形式：4种生育酚，4种生育三烯酚（Tocotrienols），分别有α、β、γ、δ。其中α-生育酚是维生素E中*&具活性，也是jia代表，在食物添加剂的命名上标记为E307。成年人的建议日摄入用量是15毫克。维生素E在植物、藻类等合成，而不能在动物中产生。维生素E在麦类、素油、水果、果仁、鱼、蔬菜等中含量丰富，包括棕榈油、橄榄油、豆油、奶油花生等。维生素E具有预防自发流产、增强免疫功能、防止未饱和脂肪酸、低密度脂蛋白和细胞膜的氧化、清除自由基、预防冠心病等作用。维生素E缺乏将导致神经性疾患，例如脊髓小脑性共济失调（spinocerebellar ataxia）、肌病（myopathies）、贫血等。通过有机溶剂萃取，必要时进行皂化处理，排除脂类、蛋白和碳水化合物的干扰，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下（294nm波长）检测分析，分离出可溶性维生素E波峰，以定量α-生育酚的含量。

产品内容

GENMED处理液（Reagent A）       20毫升

GENMED皂化液（Reagent B）  20毫升

GENMED酸性液（Reagent C）       20毫升

GENMED萃取液（Reagent D）   100毫升

GENMED溶解液（Reagent E）       20毫升

GENMED流相液（Reagent F）      500毫升

GENMED标准液（Reagent G）    500微升

产品说明书      1份

保存方式

保存GENMED标准液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖；GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品处理和标准液配制的容器

15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器

（微型）台式离心机：用于样品处理

DOUNCE匀浆器：用于裂解样品

恒温水槽或培养箱：用于样品反应孵育和晾干

高效液相色谱仪（HPLC）：用于定量测定

实验步骤

• 样品准备 

1）固态样品准备

• 秤取50毫克待测固态样品  
• 移入到一个液氮冻存管
• 即刻放进液氮罐过夜
• 次日从液氮罐里取出，即刻（kuai速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使样品冻融）
• 加入500微升GENMED处理液（Reagent A）
• 全部转移到DOUNCE匀浆器
• 用匀浆棒匀化组织（约80下）
• 全部转移到1.5毫升离心管
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升锥形离心管
• 再加入500微升GENMED处理液（Reagent A）到含有沉淀颗粒的1.5毫升离心管中
• 涡旋震荡1分钟
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液合并到上述15毫升锥形离心管中（总量1毫升）
• （选择步骤）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （选择步骤）涡旋震荡15秒
• （选择步骤）放进70℃恒温水槽孵育30分钟，其间每隔10分钟涡旋震荡5秒一次
• （选择步骤）置于冰槽里冷却1分钟
• （选择步骤）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混匀
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 强力涡旋震荡15秒
• 重复实验步骤21二次
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为1300g 
• 移取上层液相到新的15毫升锥形离心管
• 放进40℃干式培养箱晾干
• 加入500微升30℃预热的GENMED溶解液（Reagent E），混匀
• 即刻进行高效液相色谱分析（注意：如果暂时保存，建议在4℃不超过48小时；-20℃不超过3月）

2）液态样品准备

• 移取500微升待测液态样品到1.5毫升离心管
• 加入500微升GENMED处理液（Reagent A） 
• 涡旋震荡1分钟
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升锥形离心管中
• （选择步骤）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （选择步骤）涡旋震荡15秒
• （选择步骤）放进70℃恒温水槽孵育30分钟，其间每隔10分钟涡旋震荡5秒一次
• （选择步骤）置于冰槽里冷却1分钟
• （选择步骤）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混匀
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 强力涡旋震荡15秒
• 重复实验步骤12二次
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为1300g 
• 移取上层液相到新的15毫升锥形离心管
• 放进40℃干式培养箱晾干
• 加入500微升30℃预热的GENMED溶解液（Reagent E），混匀，避光
• 即刻进行高效液相色谱分析（注意：如果暂时保存，建议在4℃不超过48小时；-20℃不超过3月）

• 测定准备

• 开启仪器预热15分钟
• 根据下表设置高效液相色谱仪（HPLC）参数

• 使用GENMED流相液（Reagent F）运行1次（30毫升），以达到色谱柱均衡和温度稳定

• 标准样品配制

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入100微升GENMED溶解液（Reagent E）到1至5号管
• 移取100微升GENMED标准液（Reagent G）到1号管，混匀
• 小心移取100微升1号管稀释的GENMED标准液（Reagent G）到2号管，混匀
• 小心移取100微升2号管稀释的GENMED标准液（Reagent G）到3号管，混匀
• 小心移取100微升3号管稀释的GENMED标准液（Reagent G）到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

四、色谱分析

• 将上述配制的GENMED标准液（Reagent G）和待测样品放进30℃培养箱预热
• 每次（每个样品）注射20微升
• 每次（每个样品）运行10至20分钟
• 获得色谱波峰图：波峰面积（peak area）或峰值，保存记录
• 全部运行完成，使用适量的GENMED流相液（Reagent F）清洗色谱柱

五、计算含量

• 方法一：通过仪器中的软件进行测算
• 方法二：构建标准曲线：纵座标（Y轴）为波峰面积（peak area）；横座标（X轴）为标准α-生育酚浓度（微克/毫升），根据标准曲线获得样品对应α-生育酚浓度（微克/毫升）
• 方法三：公式计算（选择单一浓度的标准液）

样本α-生育酚浓度（微克/毫升）=【样本波峰面积（peak area）X标准α-生育酚浓度】÷对应标准α-生育酚浓度的波峰面积

注意事项

• 本产品为20次操作
• 本产品可以用于β、γ、δ-生育酚的检测
• 本产品检测范围是0.3至50毫克/升
• 操作时，须戴手套
• 试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜
• 如果样品中脂类含量高，建议皂化处理
• GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全
• 建议使用GENMED溶解液（Reagent E）作为阴性对照或作为基准线
• 色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等
• 用户可以使用已知浓度的GENMED标准液（Reagent G）或醋酸生育酚作为内参标准加入到样品中，然后进行萃取，检测回收率（recovery）
• α-生育酚的HPLC参考图谱如下

• α-生育酚的出峰时间（retention）以用户操作时，使用的GENMED标准液（Reagent G）实际出峰为准
• 用户可以使用荧光检测：激发波长290nm，散发波长330nm
• 本公司提供系列维生素检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号 名称 规格

GMS19071.2.1 GENMED通用型维生素E高效液相色谱法定量检测试剂盒 20次

GMS19071.2.1A GENMED处理液（Reagent A）     100毫升

GMS19071.2.1B GENMED皂化液（Reagent B） 100毫升

GMS19071.2.1C GENMED酸性液（Reagent C）      100毫升

GMS19071.2.1D GENMED萃取液（Reagent D） 100毫升

GMS19071.2.1E GENMED溶解液（Reagent E） 100毫升

GMS19071.2.1F GENMED流相液（Reagent F） 500毫升

GMS19071.2.1G GENMED标准液（Reagent G）      10毫升

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