氨苄青霉素
快速检测试剂盒说明书
一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物氨苄青霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氨苄青霉素抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物氨苄青霉素的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物氨苄青霉素的含量。
二、试剂盒特性
组织 ················································ 2ppb
氨苄青霉素· ········································ 100%
氨苄氨苄青霉素········································ 0.8%
邻氯氨苄青霉素 ······································· 0.2%
双氯氨苄青霉素 ······································· 0.1%
阿莫西林 ········································· 0.1%
头孢塞呋 ········································· 0.1%
组织 ········································· 60%-120%
三、试剂盒组成
1 | 微量测试孔 | 每条8孔,一板12条 | |
2 | 标准液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶标记物 | 12ml | 红色帽 |
4 | 抗体工作液 | 7ml | 蓝色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 终止液 | 7ml | 黄色帽 |
8 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 10X浓缩复溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用仪器、试剂
具备的仪器:酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹仪、恒温箱
微量移液器:单道 20~200µl、单道100~1000µl、多道 30~300 µl
试 剂:氢氧化钠、浓盐酸
五、样本前处理步骤
(a)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
配液 1 0.2M 盐酸
取 17.2ml 浓盐酸加去离子水定容至 1L
配液 2 1 M 氢氧化钠
称 4g 氢氧化钠固体加去离子水定容至100ml
配液 3 样本稀释液
将10X浓缩复溶液与去离子水 1:9 稀释后用
1、称 1±0.05g 均质后的组织至50ml离心管中,加入2ml 0.2M盐酸(见配液1),充分振荡3min;
2、再加入400µl 1M 氢氧化钠(见配液2)溶液和1.6ml样本稀释液(见配液3)溶液,充分振荡3min,室温4000r/min 以上离心 5min;
3、取上清液,用样本稀释液按1:2(50µl样本液加100µl样本稀释液)稀释,混合30s;取50 µl用于分析。
样本稀释倍数:15
六、 酶标免疫分析程序:
七、结果判定
结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法。注意样本吸光度值与其所含氨苄青霉素量成负相关。
1、粗略判定:
用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3,样本2的吸光度值为1.0,标准液吸光度值分别是:0ppb为2.243; 0.1ppb为1.816;0.3ppb为1.415;0.9ppb为0.74;2.7ppb为0.313;8.1ppb为0.155。则样本1的浓度范围是2.7ppb~8.1ppb;样本2的浓度范围是0.3ppb~0.9ppb,乘以其对应的稀释倍数即为样本中氨苄青霉素实际浓度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以个标准(0标准)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
(2)标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标,以氨苄青霉素标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中氨苄青霉素实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。
八、 注意事项
九、储藏条件和保质期
提示:酶标板真空包装袋若有漏气,酶标板仍然正常有效,不影响实验结果,请放心使用。